《新五鼠闹东京》的剧情主要讲的是北宋时期，绰号为“五鼠”的五个结拜兄弟之间的一系列搞笑的事情。由严屹宽扮演的江湖南侠展昭，在佑护包公过程中多次立下大功，被皇帝赐予 “御猫”称号。但太师庞吉妒恨皇帝对展昭的器重，且太师心生邪念想破坏“五鼠”与展昭关系，于是派人告诉“五鼠”说包公让仁宗赐展昭“御猫”，目的就是要灭“五鼠”的威风。而“五鼠”听了太师的话，心中很是不服，觉得自己堂堂“五鼠”怎么会不如一个“御猫”，“五鼠”决定前往京城与展昭比试一下，看看到底谁厉害。

随后由陈晓饰演的“锦毛鼠”带领着他的其他四个兄弟，“彻地鼠”、“穿山鼠”、“翻江鼠”以及“钻天鼠”一同前往京城，但在前往京城途中他们了解到奸贼太师庞吉之子对当地百姓的恶行，他们决定为民除害，除去庞吉父子，他们的行动被展昭得知后，得到了展昭的赞同。于是展昭加入了“五鼠”行列中，他们与庞吉父子斗智斗勇，最终不仅救了包公，还将庞吉父子绳之以法。以上便是《新五鼠闹东京》剧情介绍。